Tesis profesional presentada por Adriana Luna Diaz

Licenciatura en Biología. Departamento de Ciencias Químico-Biológicas. Escuela de Ingeniería y Ciencias, Universidad de las Américas Puebla.

Jurado Calificador

Presidente: Dr. José Luis Sánchez Salas
Vocal y Director: Dr. Xavier Soberón Mainero
Secretario: Dr. Pedro Alfredo Wesche Ebeling
Suplente y Co-director: Dr. Solon Javier Garcés Eisele

Cholula, Puebla, México a 24 de noviembre de 2006.

Resumen

Los barriles TIM, por su abundancia entre los organismos, así como por su diversidad de funciones, son un excelente modelo para estudio y manipulación. De igual forma han despertado un creciente debate alrededor de su histora evolutiva en cuanto a un origen mono o polifilético. (Lang, et.al 2000) Dentro de estos estudios se han empleado técnicas combinadas de evolución dirigida junto con ingeniería de proteínas sitio-dirigidas para modificar las propiedades de esta conformación como la adaptación a altas y bajas temperaturas, la estereo-selectividad y la especificidad al substrato; sin embargo, han sido muchos los obstáculos a los que se han enfrentado para realizar experimentos más ambiciosos como la migración catalítica fuera de la misma familia o el intercambio de subunidades completas o loops entre diferentes barriles. Entre las barreras más importantes se encuentran las la relativamente pobre exploración del espacio de secuencia, la eficiencia de transformación y la falta de un modelo estable que permita manipulaciones mucho más agresivas.

El presente proyecto evalúa por un lado, una metodología novedosa de transformación utilizando el sistema de recombinación Cre-LoxP para manipular una enzima consenso como andamiaje estable como alternativa para salvar las limitantes mencionadas. Los resultados que se obtuvieron apuntan a que la enzima además de ser estable es suficientemente flexible como para aceptar favorablemente el sitio LoxP ya que se observa una complementación de función en una cepa auxótrofa y por lo tanto, plegamiento a su estado nativo.

Luna Diaz, A. 2006. Evolución Dirigida de una Fosforribosil Antraniliato Isomerasa Consenso por medio de sus dos segmentos (ba)4. Tesis Licenciatura. Biología. Departamento de Ciencias Químico-Biológicas, Escuela de Ingeniería y Ciencias, Universidad de las Américas Puebla. Noviembre. Derechos Reservados © 2006.