Resumen

Male infertility is a public health problem that affects 50% of couples involuntarily without children. Its causes are varied and include: congenital or acquired urogenital abnormalities, malignant neoplasms, urogenital tract infections, increased scrotal temperature, endocrine disorders, genetic abnormalities, immunological factors and idiopathic male infertility. Advances in cryobiology and ART have improved the prognosis of infertile couples requiring them to achieve one or more newborns. The different techniques have indications, advantages and disadvantages. It is now known that the cryopreservation process can increase the amount of cells with fragmented DNA. This work was elaborated with the purpose of knowing the percentage of cells that show fragmentation in samples cryopreserved by different methods, in different conditions and with different time of storage and to be able to determine if this last factor is determinant so that there is more or lower percentage of fragmentation. In this study it was verified that for human samples 30 months are not determinant to observe a statistically significant increase irrespective of the method of cryopreservation that is employed. It was also analyzed if there was a significant increase of the DNA fragmentation in murine spermatozoa and thanks to the comet test it was possible to detect it from the second month. Because there is variation between the detection of increased fragmentation according to the human and murine samples, it is possible that the increase of DNA fragmentation according to the storage time will vary depending on the species and the cryoprotectant employed.

RESUMEN La infertilidad masculina es un problema de salud pública que afecta al 50% de las parejas involuntariamente sin hijos. Sus causas son variadas e incluyen: anormalidades urogenitales congénitas o adquiridas, neoplasias malignas, infecciones del tracto urogenital, aumento de la temperatura escrotal, trastornos endocrinos, anomalías genéticas, factores inmunológicos e infertilidad masculina idiopática. Los avances en criobiología y en ART han mejorado el pronóstico de parejas infértiles que las requieren para lograr uno o más recién nacidos. Las distintas técnicas tienen indicaciones, ventajas y desventajas. Actualmente se conoce que el proceso de criopreservación puede aumentar la cantidad de células con ADN fragmentado. Este trabajo se elaboró con el propósito de conocer el porcentaje de células que muestran fragmentación en muestras criopreservadas por diferentes métodos, en distintas condiciones y con diferente tiempo de almacenamiento y con base en ello, poder determinar si este último factor es determinante para que exista mayor o menor porcentaje de fragmentación. En dicho estudio se comprobó que para muestras humanas 30 meses no son determinantes para observar un aumento estadísticamente significativo independientemente del método de criopreservación que sea empleado. Se analizó además si existía un aumento significativo de la fragmentación de ADN en espermatozoides murinos y gracias a la prueba cometa fue posible detectarla a partir del segundo mes. Debido a que existe variación entre la detección de aumento de fragmentación según las muestras humanas y murinas, es posible que el aumento de la fragmentación de ADN de acuerdo al tiempo de almacenamiento varíe en función de la especie y del crioprotector empleado.

Palabras clave: Fragmentación, criopreservación, ultravitrificación, vitrificación ultrarrápida.

El acceso a esta tesis es restringido.

Sánchez Hernández, E. 2016. Evaluación de la fragmentación de ADN espermático como resultado de la ultravitrificación. Tesis Licenciatura. Bioquímica Clínica. Departamento de Ciencias Químico Biológicas, Escuela de Ciencias, Universidad de las Américas Puebla. Diciembre. Derechos Reservados © 2016.