Resumen

En este trabajo se buscó identificar el efecto del silenciamiento de la oncoproteína E5 del VPH16 sobre la expresión de genes de sialiltransferasas (ST3GAL3 y ST6GAL1) en un modelo in vitro utilizando la línea celular CaSki.

Una infección persistente con ciertos tipos de virus del papiloma humano representa el principal factor de riesgo para el desarrollo del cáncer cervicouterino. En ésta enfermedad un incremento en los niveles de ARNm de los genes ST3GAL3 y ST6GAL1 se ha relacionado con una mayor capacidad de invasión. El virus del papiloma humano presenta un genoma de ocho marcos abiertos de lectura, distribuidos en tres subregiones; la región temprana (early) contiene seis marcos abiertos de lectura que codifican para proteínas no estructurales de las cuales, las proteínas E5, E6 y E7 contribuyen a la progresión tumoral y son consideradas como oncoproteínas virales. Estudiar el posible papel de la oncoproteína E5 sobre la expresión de glicogenes nos permitirá profundizar en los cambios moleculares que se producen durante la infección viral y que podrían ser determinantes para la transformación maligna.

Para la realización del trabajo, se utilizó como base el protocolo "Clone oligos into pLKO vectors for shRNA Constructs" de "The RNAi Consortium". En donde el plásmido pLKO.1-TRC fue digerido con enzimas de restricción; para una posterior inserción de ARN de interferencia en posición 66 o 108 del marco abierto de lectura correspondiente a la oncoproteína E5. Células competentes DH5α fueron utilizadas para comprobar una correcta inserción del plásmido; en donde el ADN extraído de ellas, se utilizó en la transfección transitoria de la línea celular CaSki. La evaluación del silenciamiento de E5 y de los genes ST3GAL3 y ST6GAL1 fueron realizados por medio de PCR cuantitativa de tiempo real.

En el presente trabajo el silenciamiento transitorio de E5 en la línea celular CaSki se logró de manera satisfactoria con la misma eficacia para los ARN de interferencia en posición 66 y 108. De igual manera se observó que tal silenciamiento disminuye los niveles de expresión del gel ST6GAL1, pero no tiene efecto sobre ST3GAL3; concluyendo que la oncoproteína E5 es capaz de modificar la expresión de glicogenes específicamente del gen ST6GAL1, lo que podría implicarla en los cambios en la expresión de algunos antígenos tumorales sialilados.

Palabras clave: cancer, glicosilación, vph,.

El acceso a esta tesis es restringido.

Lara Gutiérrez, A. 2016. Efectos de la proteína E5 en la glicosilación. Tesis Licenciatura. Bioquímica Clínica. Departamento de Ciencias Químico Biológicas, Escuela de Ciencias, Universidad de las Américas Puebla. Diciembre. Derechos Reservados © 2016.